【摘要】目的：探討建立一種肝硬化基礎(chǔ)上大鼠肝癌模型的方法。方法：60只雄性SD大鼠隨機分為兩組，對照組和實驗組，按60mL/LCCl4和100mL/L食用白酒的方法誘導(dǎo)肝癌模型。觀察兩組大鼠不同時期質(zhì)量變化，死亡率，肝假小葉形成率及肝癌結(jié)節(jié)發(fā)生率。結(jié)果：誘導(dǎo)16wk后，對照組大鼠質(zhì)量明顯增加，無死亡，無肝硬化，無肝癌形成。實驗組大鼠在實驗過程中質(zhì)量增長緩慢，2wk后假小葉形成率90%，繼續(xù)誘導(dǎo)4wk后癌結(jié)節(jié)形成率40%.實驗過程中大鼠的死亡率為10%.結(jié)論：CCl4和食用白酒可成功誘導(dǎo)大鼠肝硬化模型，延長誘導(dǎo)時間可產(chǎn)生一定數(shù)量的肝癌模型。

　　【關(guān)鍵詞】肝硬化；肝腫瘤；動物模型；四氯化碳

　　0引言

　　肝硬化基礎(chǔ)上的肝癌在我國發(fā)病率比較高，也是一種常見及重要的死亡原因。建立一個類似于人類肝硬化基礎(chǔ)上肝癌的動物模型是深入研究肝癌的不可缺少的環(huán)節(jié)。本實驗我們通過腹部皮下注射CCl4并用100mL/L食用白酒代替飲用水復(fù)制大鼠肝硬化模型，通過延長造模時間，來探討建立一種理想的肝硬化基礎(chǔ)上的肝癌動物模型的方法。

　　1材料和方法

　　1.1材料

　　純系SD雄性大鼠60只，體質(zhì)量180～220g，購自第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心，按清潔級標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)，普通顆粒飼料喂養(yǎng)。四氯化碳（分析純）購自寧波市江東化學(xué)試劑廠（批號：9406661）。橄欖油購自上海衛(wèi)輝化學(xué)試劑廠（批號：930112）。TD型電子天平（余姚市金諾天平有限公司）由第四軍醫(yī)大學(xué)動物實驗中心提供。顯微鏡（Olympus）由西安市鐵路中心醫(yī)院病理科提供。

　　1.2方法

　　將實驗動物隨機分成2組，每組30只。對照組：按3μL/g體質(zhì)量給予橄欖油溶液腹壁皮下注射，2次/wk，普通飼料加清水喂養(yǎng)；實驗組大鼠按3μL/g體質(zhì)量給予600mL/LCCl4橄欖油溶液腹壁皮下注射，100mL/L食用白酒溶液作為飲用水，普通顆粒飼料喂養(yǎng)16wk.監(jiān)測實驗期間大鼠體質(zhì)量變化、活動及對外界的反應(yīng)情況，同時記錄大鼠死亡情況及死亡時間。在造模的第4，8，12，和16wk觀察兩組大鼠肝臟的大體及病理組織變化。

　　統(tǒng)計學(xué)處理：采用t檢驗，P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

　　2結(jié)果

　　2.1大體觀察對照組大鼠毛發(fā)有光澤，精神狀態(tài)好，活動多，食欲佳，對外界刺激反應(yīng)靈敏，實驗組大鼠毛發(fā)凌亂，無光澤，食欲差，精神萎靡，活動少，對外界刺激反應(yīng)慢。對照組大鼠體質(zhì)量顯著增加，實驗組大鼠實驗過程中體質(zhì)量增加緩慢，尤以前期增長更為緩慢。第12周時，實驗組大鼠體重與對照組大鼠體質(zhì)重相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義［（286±12）gvs（398±16）g，P<0.01］。實驗過程中對照組大鼠無死亡，實驗組大鼠的死亡率為10%.

　　2.2肝臟組織學(xué)改變對照組大鼠肝臟紅潤，鏡下細(xì)胞大小一致，細(xì)胞排列呈條索狀，以中央靜脈為中心呈放射狀，肝竇無狹窄，小葉及匯管區(qū)無炎細(xì)胞浸潤，表面光滑無結(jié)節(jié)，實驗組大鼠誘導(dǎo)4wk可見肝細(xì)胞變性、壞死，8wk可見部分肝細(xì)胞變性和壞死，壞死以小葉周圍顯著，匯管區(qū)少量炎癥細(xì)胞浸潤及纖維組織增生，12wk可見肝內(nèi)廣泛假小葉形成，假小葉內(nèi)可見纖維再分隔現(xiàn)象，現(xiàn)時伴有明顯的肝細(xì)胞再生結(jié)節(jié)，16wk癌變肝組織可見癌巢形成，癌細(xì)胞具有多形性和明顯異型性呈多角型，核大，核仁明顯，并可見多核巨細(xì)胞（圖1）。

　　3討論

　　CCl4是最為常用的肝臟毒素，最早、最廣泛用于實驗性肝纖維化研究［1-2］，其誘導(dǎo)慢性肝損傷的機理是：在肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，CCl4通過肝微粒體細(xì)胞色素氧化酶激活后，產(chǎn)生自由基CCl3及Cl.還可攻擊膜不飽和脂質(zhì)，引發(fā)活性氧自由基的產(chǎn)生和脂質(zhì)過氧化，損傷肝細(xì)胞，從而導(dǎo)致狄氏間隙內(nèi)原本靜止的貯脂細(xì)胞活化，釋放Ⅳ型膠原酶，降解Ⅳ型膠原，肝細(xì)胞從合成分泌Ⅲ型膠原變?yōu)楹铣煞置贗型膠原，取代了Ⅳ型膠原，促使肝臟纖維化。乙醇法誘導(dǎo)慢性肝損傷的機制是：乙醇進入肝細(xì)胞線粒體三羧酸循環(huán)，脂肪酸氧化減少而合成增加，甘油三酯和脂肪酸在肝內(nèi)蓄積導(dǎo)致肝細(xì)胞脂肪變。肝臟持續(xù)的炎癥反應(yīng)激活kupffer細(xì)胞，同時乙醇還可以直接損傷血管內(nèi)皮，甚至發(fā)展為肝硬化。此外，乙醇可增強CCl4對肝細(xì)胞的毒性作用，因此CCl4與乙醇聯(lián)合應(yīng)用可促進肝硬化的形成。金峰等［3］將SD大鼠分為兩組，實驗組給予濃度逐漸增加的CCl4，并用食用白酒代替醫(yī)用乙醇溶液，對照組給予單純CCl4，結(jié)果發(fā)現(xiàn)實驗組9wk內(nèi)死亡率為7.5％，對照組為17.5％；鏡下假小葉形成率實驗組為90.0％，對照組為75.0％，并認(rèn)為適度提高CCl4的濃度并采用食用白酒代替醫(yī)用乙醇溶液誘導(dǎo)大鼠肝硬化模型的死亡率低，成模率高。本實驗在此研究基礎(chǔ)上，我們采用600mL/LCCl4聯(lián)合100mL/L乙醇方法誘導(dǎo)肝硬化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)實驗組12wk內(nèi)大鼠死亡率為10%，假小葉形成率為90%，并在此基礎(chǔ)上繼續(xù)給予相同條件誘導(dǎo)4wk，結(jié)果發(fā)現(xiàn)部分大鼠癌結(jié)節(jié)形成，形成率為40%.實驗表明基于傳統(tǒng)的肝硬化造模方法，通過延長造模時間可以對大鼠的肝臟持續(xù)產(chǎn)生損傷，這種損傷到一定程度可誘發(fā)癌變的發(fā)生，產(chǎn)生一定數(shù)量的肝癌模型。

　　綜上所述，本實驗成功地制備了大鼠肝硬化基礎(chǔ)上的肝癌模型，并在顯微鏡下觀察到了大鼠的肝硬化結(jié)節(jié)形成及鏡下癌結(jié)節(jié)、癌細(xì)胞形成，為以后研究肝癌打下了基礎(chǔ)。

　　【參考文獻】［1］韓德五，馬學(xué)慧，趙元昌。肝硬化動物模型的研究［J］。山西醫(yī)藥雜志，1979，4（1）：1-6.

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　?。?］金峰，衰芳，薛建設(shè)，等。四氯化碳綜合法誘導(dǎo)大鼠肝硬化模型方法的探討［J］。福建醫(yī)藥雜志，2003，25（5）：127-128.